Анджела Кристина М. Лузо (4) Уильям Д. Беланджеро (3) и Мария Хелена А. Сантана (1)
Важные факторы центрифугирования для получения
богатой тромбоцитами плазмы
1). Факультет разработки материалов и биопроцессов,
Университет Кампинаса, Бразилия
2). Научно-исследовательский институт спортивной медицины,
ортопедии и регенерации, Бразилия
3). Отделение ортопедии и травматологии,
Университет Кампинаса, Бразилия
4). Центр гематологии и гемотерапии, Банк Пуповинной крови, Университет Кампинаса, Бразилия
2014
Богатая тромбоцитами плазма (PRP) богата факторами роста, играющими важную роль в заживлении тканей. Широкое разнообразие описанных протоколов получения PRP приводят к различным составам, которые вызывают различные биологические реакции и препятствуют сравнению результатов.
Это исследование направлено на то, чтобы выделить соответствующие факторы центрифугирования для получения воспроизводимого и качественного результата.
Материал и методы
Образцы крови были взяты у 20 здоровых доноров, подписавших свободное информированное согласие.
Две стадии центрифугирования (вращения) были проанализированы на предмет влияния центробежного ускорения, времени, объема обработки градиента и количества тромбоцитов.
Чистую богатую тромбоцитами плазму (P-PRP) характеризовали как концентрацию тромбоцитов, целостность и жизнеспособность (измерение sP-селектина).
Результаты
Более низкие центробежные ускорения способствуют разделению тромбоцитов. Обработка 3,5 мл крови при 100G в течение 10 мин (1-й отжим), 400G в течение 10 мин (2-й отжим) с удалением 2/3 остаточной плазмы способствовала высокому восстановлению тромбоцитов (70-80%) и концентрации (5x), сохраняя целостность и жизнеспособность тромбоцитов. Восстановление тромбоцитов было снижено при большем объеме изначальной крови (8,5 мл).
Вывод
Центробежное ускорение, время, объем крови и минимизация градиента тромбоцитов перед отбором проб являются важными факторами для обеспечения воспроизводимых композиций в рамках аутологичной природы PRP.
Тромбоциты богаты факторами роста, которые играют важную роль в заживлении тканей. Многочисленные исследования продемонстрировали клиническое применение и заметные результаты PRP в стоматологии
[2], челюстно-лицевая хирургия [3], пластическая хирургия [4], ортопедия [5], ревматология [6], а также лечение различных видов травм, которые включают хронические раны [7, 8] и травмы мышц [9].
PRP производится для двух целей: одна для сбора тромбоцитов в терапевтических целях, а другой - для тестирования функции тромбоцитов при PRP с использованием агрегометрии.
В этой работе он изучался только в терапевтических целях. Широкий разброс в сообщаемых протоколах получения PRP может привести к получению образцов с различными составами, которые могут вызывать различные биологические реакции [1].
эритроцитов, последующего центрифугирования для концентрирования тромбоцитов и других компонентов и активации образец путем добавления агониста тромбоцитов (рис. 1).
Перед стадией активации тромбоцитов переменные процесса, которые могут влиять на целостность тромбоцитов (наряду с составом и эффективностью PRP) включают:
- Количество этапов центрифугирования;
- Центробежное ускорение;
- Время центрифугирования; [10].
В дополнение к тромбоцитам, состав лейкоцитов также может быть проанализирован, поскольку концентрация этих клеток также является важным фактором в заживлении тканей [11].
Рисунок 1: Технологическая схема, описывающая общий процесс подготовки PRP.
Кровь первоначально собирается в пробирки, содержащие антикоагулянты. Первый этап отжима выполняется с постоянным ускорением для отделения эритроцитов от оставшегося объема крови.
После первого этапа отжима кровь разделяется на три слоя: верхний слой, который содержит в основном тромбоциты и лейкоциты, промежуточный слой, известный как охристый слой и богатый лейкоцитами, и нижний слой, состоящий в основном из эритроцитов. Только верхний слой плюс охристый слой переносится в пустую пробирку.
Затем выполняется второй этап центрифугирования. Верхняя часть объема, состоящая в основном из PPP (бедной тромбоцитами плазмы), удаляется для создания PRP (богатой тромбоцитами плазмы). Концентрации тромбоцитов и лейкоцитов в каждом из различных слоев измеряются для характеристики качества PRP.
Сторонники PRP, содержащих высокие концентрации лейкоцитов (обогащенная лейкоцитами и тромбоцитами плазма (L-PRP) в соответствии с классификацией Эренфеста [12]) считают, что наличие лейкоцитов обеспечивает естественную защиту от инфекций и аллергических реакций [12, 13].
Другие авторы не рекомендуют наличие высоких концентраций лейкоцитов в PRP (чистая богатая тромбоцитами плазма (PPRP) по данным Ehrenfest et al.) [12].
Наличие нейтрофилов, которые составляют 65% лейкоцитов и более 95% гранулоцитов, могут быть вредными, поскольку они разрушают окружающие ткани, даже если ткань не повреждена. Эти нейтрофилы выделяют неселективные и токсичные активные
формы кислорода, которые включают гипохлорит, супероксид и гидроксильные радикалы на высоких уровнях [14, 15].
В современной литературе существует множество протоколов, описывающих оптимальные условия центрифугирования.
Однако эти различные протоколы были оптимизированы в отношении различных переменных процесса, таких как объем крови при заборе, отбор проб, количество вращений, период времени центрифугирования и диапазон центробежного ускорения.
Учитывая сложность аутологичного продукта, такого как PRP, и необходимость контроля качества при клиническом применении, крайне важно продемонстрировать возможность проведения процесса с получением стабильных результатов.
Таким образом, цель этого исследования состоит в том, чтобы выделить соответствующие факторы, связанные с этапом центрифугирования.
Эта статья в в своей основе посвящена подготовке PRP без использования коммерческих наборов.
Это исследование было одобрено комиссией по этике
Комитета Школы медицинских наук Университета
Кампинаса (UNICAMP), CAAE: 0972.0.146.000-11.
При приготовлении P-PRP объем приблизительно
3,15 мл забор крови производили в пробирки объемом 3,5 мл (Vacuette, Ref. 454327; Greiner Bio-One), который содержал 0,35 мл антикоагулянта (цитрат натрия 3,2%). Пробирка объемом 8,5 мл также использовалась для сравнения эффектов полученного результата.
2.2. Получение P-PRP
2.2.1. Первый этап центрифугирования
Для первого этапа кровь центрифугировали при различных центробежных силах в диапазоне от 50 до 820 ×g (50, 70, 100, 190, 280, 370, 460, 550, и 820 ×g) в течение 10 мин.
Обычная модель центрифуги 380 R (Hettich, Zentrifugen).
в основном из лейкоцитов), верхний слой собирали
пипеткой.
Изъятие фракции было выполнено осторожно, чтобы не
захватить нижний слой эритроцитов и слой охристого покрытия.
В зависимости от центробежной силы вращения собранный объем составлял от 1 до 2 мл. Затем собранный образец переносили в пустую силиконизированную стеклянную пробирку для гомогенизации.
После того, как образец был надлежащим образом перемешан, подсчет клеток крови проводили с помощью оборудования для подсчета клеток (Микроскоп ES 60 Horiba).
Кровь первоначально центрифугировали при 100×g
в течение 10 мин на первом этапе центрифугирования.
Приблизительно 1,2 мл верхнего слоя образца, прошедшего первый этап, собирался и переносился в 6 пустых пробирок.
Пробирки снова центрифугировали в течение 10 мин при различных центробежных силах: 200, 400, 800, 1200 и 1600×g.
плазма (PPP), была удалена.
Оставшийся объем PPRP гомогенизировали и анализировали на наличие тромбоцитов и лейкоцитов.
P-PRP характеризовался (i) измерением градиента концентрации тромбоцитов перед удалением PPP; (ii) наблюдением клеточного состава после удаления PPP и последующего смешивания образцов; и (iii) исследованием целостности тромбоцитов.
2.3.3. Градиент концентрации тромбоцитов
Градиент концентрации тромбоцитов в образцах анализировали сразу после второго этапа центрифугирования путем размещения иглы гематологического счетчика в различных точках вдоль трубки для того, чтобы найти конец PPP и начало P-PRP.
После удаления PPP (1/2 верхнего объема) оставшийся объем P-PRP анализировали на предмет восстановления тромбоцитов. Перед подсчетом тромбоцитов P-PRP смешивали инверсией, вручную в течение 30 секунд или механически в течение 30 и 60 минут, для минимизации градиента.
2.3.4. Целостность тромбоцитов
Влияние центробежного ускорения на целостность тромбоцитов в образце P-PRP оценивали путем измерения sP-селектина после второго этапа центрифугирования.
Sp-селектин плазмы отражает активацию тромбоцитов и высвобождение факторов роста [17]. Следовательно, в этом случае целостность тромбоцитов означает, что они не активируются во время центрифугирования,
и сохраняется диапазон начальной концентрации sP-селектина в плазме.
Все анализы проводились с использованием наборов для иммуноферментного анализа (ELISA) (R & D Systems) в соответствии с инструкциями и спецификациями производителя.
2.3.5.Объем обработки
Влияние объема крови в пробирке оценивали с использованием коммерческих пробирок объемом 3,5 мл
и 8,5 мл. Образцы центрифугировали при 100×g и 10 мин. Кроме того, влияние объема PRP, обработанного на втором этапе центрифугирования, оценивали в пробирках объемом 3,5 мл при 400×g и 10 мин.
Во всех случаях было проведено по меньшей мере два эксперимента
Результаты
3.1. Экспериментальные факторы
3.1.1. Влияние времени центрифугирования
Таблица 1: Сравнение эффективности извлечения плазмы, тромбоцитов и лейкоцитов в верхнем слое после первого этапа центрифугирования 100×g в течение 6 и 10 мин. Объем крови при заборе: 3,5 мл.
Влияние времени центрифугирования при низкой скорости вращения оценивали по отношению к концентрации лейкоцитов в верхнем слое.
Основываясь на данных, собранных после первого этапа, представляется, что более длительные периоды времени несколько увеличивали восстановление тромбоцитов и
снижали концентрации лейкоцитов в верхнем слое.
Следовательно, время может быть контрольным параметром, когда в образце PRP требуются низкие уровни лейкоцитов, таких как гранулоциты и лимфоциты.
3.1.2. Градиент концентрации тромбоцитов Градиенты концентрации тромбоцитов образуются после обоих этапов центрифугирования. Различные факторы способствуют этому градиенту, такие как размеры тромбоцитов, из диапазона периферических тромбоцитов, измеряемых в фемтолитрах (10-15 Л), пока не исчезнут биологические различия между индивидуумами наряду с изменчивостью гематокрита.
эритроциты неизбежно присутствуют в том объеме, который был перенесен с первого вращения.
Присутствие этих оставшихся эритроцитов может образовывать гранулы на дне пробирки, которые адсорбируют тромбоциты и лейкоциты на ее поверхности, что подтверждается экспериментально.
Ручного перемешивания в течение короткого периода
времени было недостаточно для полной ресуспендации тромбоцитов, и наблюдалась большая вариабельность в подсчете тромбоцитов.
Образцы, механически перемешанные путем инверсии пробирки в течение 30 или 60 мин, показали улучшенную эффективность извлечения тромбоцитов в PPRP (75-80%) независимо от центробежного ускорения, которое
был применен.
Таким образом, примерно 20% тромбоцитов оставались
адсорбированными в гранулах эритроцитов. Согласно тесту Тьюки (P =0,05), нет статистических различий для 30- или 60-минутной смеси.
Остаточное количество тромбоцитов в PPP было минимальным, когда применялись центробежные ускорения 400×g или выше.
3.1.3. Целостность тромбоцитов
Начальные концентрации sP-селектина в плазме крови у двух доноров варьировались от 18 до 40 нг/мл.
Эти значения считаются находящимися в нормальном диапазоне значений концентрации для плазмы крови человека [18].
На рисунке справа показано, что уровень sP-селектина от обоих доноров увеличивался, когда центробежное ускорение составляло 800×g и 1200×g, что указывает на активацию тромбоцитов во время центрифугирования (в исследовании рассматривается, как потеря целостности тромбоцитов).
3.2. Выполнение стадий центрифугирования и P-PRP.
Композиция в двух вращениях
3.2.1. Первый этап центрифугирования
Состав образцов P-PRP, закрученных при различных центробежных ускорениях, показан на рисунке 3(а).Среднее количество тромбоцитов в крови у всех доноров составило 250,0 Пк/мм3 (±45.2).
Как и ожидалось, эффективность извлечения тромбоцитов повышалась по мере увеличения центробежного ускорения с 50 до 70×g.
Эффективность восстановления достигла пика в диапазоне от 70 до 100×g и начала снижаться в диапазоне от 190 до 820×g.
Эффективность извлечения плазмы повышалась с увеличением центробежной силы. Восстановление
лейкоцитов в P-PRP оставалось от 5 до 10%, независимо от приложенных центробежных ускорений.
Была определена установка 100×g для центробежного ускорения и времени 10 мин, чтобы обеспечить максимальное извлечение тромбоцитов;
проверки данных.
На рисунке 3(b) показано, что среднее восстановление
тромбоцитов, плазмы и лейкоцитов составило приблизительно 80%, 65% и 8% соответственно.
3.2.2. Второй этап центрифугирования
После удаления верхнего слоя плазмы (1/2 объема - слой PPP), концентрация тромбоцитов в оставшемся образце P-PRP была примерно в 3 раза больше, чем исходная концентрация.
Для достижения концентрации тромбоцитов, которая в 5 раз превышала исходную, необходимо было удалить 2/3 объема плазмы после второй этапа центрифугирования (таблица 2).
Для центробежного ускорения в диапазоне от 400 до 1600×g уровень лейкоцитов в слое PPP не измерялся.
Несмотря на переменную природу PRP, можно
оптимизировать процесс центрифугирования для получения образцов PRP с постоянными и воспроизводимыми составами.
Таблица 2: Состав тромбоцитов и лейкоцитов в образцах PRP после второго этапа центрифугирования (400xG ×10 мин).
Согласно гематокриту донора, объемы верхней фазы после первого этапа варьировались от 1,0 до 1,4 мл.
3.3. Влияние объема крови
Работа с большим объемом исходной крови (8,5 мл) в одной пробирке снизила эффективность извлечения тромбоцитов и отделение эритроцитов по сравнению с 3,5 мл при тех же условиях.
Следовательно, в этой ситуации центробежная
ускорение и время должны быть скорректированы для
Аналогичные результаты были получены, когда различные объемы верхнего слоя были перенесены на второй этап центрифугирования.
Концентрация тромбоцитов была благоприятной, и процент оставшихся тромбоцитов в PPP уменьшался при меньших объемах исходной крови.
Центрифугирование является одним из наиболее широко используемых процессов при разделении жидкость - жидкость или твердое вещество - жидкость.
Он основан на приложении центробежной силы, которая намного выше, чем гравитация. Разница в размере и плотности частиц в различных фазах является движущей силой, ответственной за разделение.
Во время процесса центрифугирования, движение частицы является результатом действующей центробежной силы в радиальном направлении, силы тяжести в направлении вниз и силы сопротивления в направлении, противоположном движению частицы. Эта сила трения пропорциональна скорости частицы и вязкости жидкости в течение Стокса.
Все упомянутые силы быстро уравновешиваются. Величина действующей центробежной силы зависит от кажущейся массы частицы (с поправкой на плавучесть), угловая скорость и ее расстояние от оси центробежной головки или ротора [19, 20]. Чем больше расстояние от ротора, тем больше центробежная сила, действующая на частицу.
В случае с кровью центробежная сила и время управляют отделением эритроцитов в нижнем слое, объемом плазмы в верхнем слое и эффективностью восстановления тромбоцитов.
В соответствии с размером анализируемых коммерческих пробирок расстояния между поверхностью крови и
ротором составляли 4,9 см и 3,0 см для обрабатываемых объемов 3,5 мл и 8,5 мл соответственно.
Следовательно, при той же угловой скорости средняя центробежная сила, приложенная к эритроцитам, уменьшалась с меньшим средним расстоянием от ротора для обрабатываемого большего объема (8,5 мл).
Эти факторы объясняют снижение отделения эритроцитов в нижнем слое, а также эффективность восстановления тромбоцитов в верхнем слое.
Чтобы восстановить ту же эффективность разделения, отделения эритроцитов должна быть восстановлена за счет увеличения времени и центробежного ускорения.
В соответствии с физическим поведением, экстраполяция рабочих параметров не является прямой, поскольку она включает экспоненциальную зависимость от расстояния, пройденного частицами при центрифугировании.
Этот фактор также имеет значение, когда разные объемы передаются от первого ко второму вращению. В этом случае при одних и тех же параметрах центрифугирования оставшееся количество тромбоцитов в PPP изменяется из-за изменения центробежной силы, действующей на тромбоциты.
Как следствие, также изменяется коэффициент концентрации тромбоцитов.
После центрифугирования исходной крови внутри пробирки образуется градиент концентрации для различных компонентов крови.
Таким образом, для обеспечения надежных измерений образец должен быть предварительно хорошо перемешан.
На втором этапе центрифугирования градиенты концентрации более интенсивны, поскольку тромбоциты
адсорбируются на поверхности оставшихся эритроцитов.
Присутствие некоторого количества эритроцитов в объеме, переданном с первого этапа неизбежно.
Следовательно, для обеспечения ресуспензии тромбоцитов перед измерением концентрации требуется эффективное механическое перемешивание путем инверсии.
Многочисленные протоколы пытались оптимизировать процедуру центрифугирования с использованием различных стандартов производительности и параметров центрифугирования. Anitua и соавт. [21] использовали только одну стадию центрифугирования и собирали объем непосредственно над слоем эритроцитов.
Этот протокол позволил получить коэффициент концентрации тромбоцитов на 2,67 выше исходного значения. Когда собран весь объем верхнего слоя, независимо от того, включен ли слой защитного покрытия, могут быть выполнены дополнительные вращения для достижения более высоких коэффициентов концентрации тромбоцитов (>3×) [22, 23].
Kahn и др. (1976) определили, что центробежное ускорение 3730×g в течение 4 мин является оптимальным
условием для получения наивысшей концентрации тромбоцитов из 478 мл исходной крови [24].
Самая высокая эффективность восстановления тромбоцитов, полученная Slichter и Harker (1976), составила 80% при использовании образца из 250-450 мл крови, центрифугированного при 1000×g в течение 9 минут [25].
Было замечено, что последующая стадия центрифугирования 3000×g в течение 20 мин снижала жизнеспособность тромбоцитов.
Ландесберг и др. получены образцы PRP, концентрация которых примерно в 3,2 раза превышала исходную концентрацию крови. Процедура центрифугирования обрабатывала 5 мл крови в течение двух вращений
при 200×g в течение 10 мин на вращение [23].
В большинстве этих исследований авторы ссылаются только на конечный коэффициент концентрации, а
не на эффективность извлечения.
Таким образом, эффективность этих протоколов не может быть точно измерена. В нашем исследовании максимальное восстановление тромбоцитов (70-80%) было получено на первой стадии центрифугирования, когда ускорение 100×g в течение 10 мин было на 3,5 мл крови (рис. 3). Этот обработанный образец имел коэффициент концентрации, который в 2 раза превышал исходную концентрацию. После второй стадии коэффициент концентрации тромбоцитов PRP в 3-5 раз превышал исходную концентрацию за счет удаления 1/2 или 1/3 верхнего объема.
В том же исследовании было замечено, что центробежные ускорения, превышающие 250×g, приводили к образованию гранул тромбоцитов, которые не могли быть ресуспендированы [23].
В нашем исследовании было показано, что ресуспендирование примерно 85% гранул было возможно путем механическое перемешивание образцов в течение 30 мин.
Ресуспензия тромбоцитов была успешной даже при применении высоких ускорений, таких как 1600×g в течение 10 минут.
Джо и др. достигнута лучшая эффективность (92%) за счет применения ускорения 900×g в течение 5 мин для первого этапа отжима [22]. Было использовано в общей сложности 9 мл крови, и была измерена концентрация тромбоцитов, которая составила 310,7 ± 78,5 × 103/мм3. Максимальная эффективность для второго этапа центрифугирования (84%) была получена путем ускорения 1500×g в течение 15 мин. Концентрация тромбоцитов составила 633,2 ± 91,6 × 103/мм3, что в 4,2 раза превышало исходную концентрацию.
Однако, целостность тромбоцитов не оценивалась. Наши результаты показывают, что можно достичь коэффициента концентрации, который в 5 раз превышает базовый уровень, применяя меньшее центробежное
ускорение на второй стадии отжима (400×g) за меньшее время (10 минут).
Эта настройка гарантирует, что тромбоциты не активируются во время центрифугирования.
Bausset и др. [26] обнаружили, что центрифугирование 130 или 250×g в течение 15 мин является оптимальным при выполнении процедуры, включающей два вращения. Коэффициент концентрации тромбоцитов, равный 3,47, был получен из обработанного 8,5 мл крови, и 2,0 мл плазмы обрабатывали на втором этапе центрифугирования.
Несмотря на то, что использовались разные методы, авторы оценили целостность тромбоцитов, и полученные данные согласуются с данными нашего исследования.
Изучая первую стадию вращения, Араки и др. получен образец PRP, который имел 70-80% восстановления тромбоцитов и 10-35% восстановление лейкоцитов путем применения низких ускорений 70×g в течение 10 мин [27]. При 230-270×g они достигли аналогичного восстановления тромбоцитов; однако эффективность восстановления лейкоцитов составила всего 4–6%. Для второго этапа вращения ускорение 2300×g применялось 10 мин.
Коэффициент концентрации тромбоцитов был в 7,4 раза выше исходного уровня после удаления примерно 1/10 PPP и добавлением этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) в качестве антикоагулянта. Однако при использовании ACD эффективность восстановления тромбоцитов составляла всего 35%.
Авторы объяснили это различие антикоагулянтом, снижающим целостность тромбоцитов в образце.
Следовательно, целостность тромбоцитов является важным параметром, который следует оценивать.
Маццокка и др. [28] проанализировали 3 протокола для подготовки. Образцы PRP с различным составом: низкий уровень тромбоцитов (382×103/мм3) и низкий уровень лейкоцитов (0,6 × 103/мм3). Процесс с одним этапом вращения при 1500 об/мин в течение 5 мин (10 мл крови); высокий уровень тромбоцитов (940 × 103/мм3) и высокий уровень лейкоцитов (17 × 103/мм3) процесс с одним этапом вращения при 3200 об/мин в течение 15 мин (27 мл крови); и процесс двойного центрифугирования (1500 об/мин в течение 5 мин и 6300 об/мин для 20 мин), что приводило к более высокой концентрации тромбоцитов (472 ×103/мм3) и более низкий уровень лейкоцитов (1,5 × 103/мм3).
Во многих других исследованиях [29, 30] указаны центробежные ускорения при вращениях в минуту (об/мин) вместо в ×g, что усложняет задачу сравнения и воспроизведения их результатов.
Следуя выделенным аспектам и наблюдениям, сделанным в этом исследовании, можно получить требуемый состав PRP, подкрепленный надежными измерениями и выбранными переменными в процессе.
Эффективными условиями для восстановления тромбоцитов являются низкое центробежное ускорение (около 100×g, 10 минут) при первом вращении и около 400 ×g при втором вращении для предотвращения воздействия на активирующие тромбоциты.
Будущие применения препаратов PRP также должны учитывать что нарушается относительное соотношение тромбоцитов к белкам плазмы
втором вращении), предотвращение агрегации тромбоцитов и минимизация градиента тромбоцитов перед измерениями являются основными факторами, которые необходимо контролировать на стадии центрифугирования
для получения и характеристики PRP.
Соблюдение этих факторов обеспечивает общее качество PRP, позволяя ограничивать только вариативность результатов к аутологичной природе продукта. Это отправная точка для сравнения биологических результатов, а также для стандартизации PRP для конкретных применений in vivo.
Конфликт интересов
Авторы заявляют, что у них нет конфликта интересов.Подтверждения
Авторы выражают признательность за финансовую поддержку FAPESP
(Фонд Ампаро в Пескиса-ду-Эстадо-де`Сан-Паулу),
Проекты № 2010/11758-3 и 2010/17434/5, а также Университет Кампинаса.
[1] L. Engebretsen, K. Steffen, J. Alsousou et al., “IOC consensus paper on the use of platelet-rich plasma in sports medicine,” British Journal of Sports Medicine, vol. 44, no. 15, pp. 1072–1081, 2010.
[2] E. Anitua, “Plasma rich in growth factors: preliminary results of use in the preparation of future sites for implants,” International Journal of Oral and Maxillofacial Implants, vol. 14, no. 4, pp. 529– 535, 1999.
[3] P. Gentile, D. J. Bottini, D. Spallone, B. C. Curcio, and V. Cervelli, “Application of platelet-rich plasma in maxillofacial surgery: clinical evaluation,” Journal of Craniofacial Surgery, vol. 21, no. 3, pp. 900–904, 2010.
[4] V. Cervelli, P. Gentile, M. G. Scioli et al., “Application of plateletrich plasma in plastic surgery: clinical and in vitro evaluation,” Tissue Engineering C: Methods, vol. 15, no. 4, pp. 625–634, 2009.
[5] D. Dallari, L. Savarino, C. Stagni et al., “Enhanced tibial osteotomy healing with use of bone grafts supplemented with platelet gel or platelet gel and bone marrow stromal cells,” The Journal of Bone & Joint Surgery A, vol. 89, no. 11, pp. 2413–2420, 2007.
[6] G. Filardo, E. Kon, M. T. P. Ruiz et al., “Platelet-rich plasma intra-articular injections for cartilage degeneration and osteoarthritis: single- versus double-spinning approach,” Knee Surgery, Sports Traumatology, Arthroscopy, vol. 20, no. 10, pp. 2082–2091, 2012.
[7] A. Cieslik-Bielecka, T. Bielecki, T. S. Gazdzik, J. Arendt, W. Krol, and T. Szczepanski, “Autologous platelets and leukocytes ´ can improve healing of infected high-energy soft tissue injury,” Transfusion and Apheresis Science, vol. 41, no. 1, pp. 9–12, 2009.
[8] P. Rozman and Z. Bolta, “Use of platelet growth factors in treat- ˇ ing wounds and soft-tissue injuries,” Acta Dermatovenerologica Alpina, Pannonica et Adriatica, vol. 16, no. 4, pp. 156–165, 2007.
[9] J. W. Hammond, R. Y. Hinton, L. A. Curl, J. M. Muriel, and R. M. Lovering, “Use of autologous platelet-rich plasma to treat muscle strain injuries,”American Journal of Sports Medicine, vol. 37, no. 6, pp. 1135–1142, 2009.
[10] S. Harrison, P. Vavken, S. Kevy, M. Jacobson, D. Zurakowski, and M. M. Murray, “Platelet activation by collagen provides sustained release of anabolic cytokines,” American Journal of Sports Medicine, vol. 39, no. 4, pp. 729–734, 2011.
[11] E. A. Sundman, B. J. Cole, and L. A. Fortier, “Growth factor and catabolic cytokine concentrations are influenced by the cellular composition of platelet-rich plasma,”American Journal of Sports Medicine, vol. 39, no. 10, pp. 2135–2140, 2011.
[12] D. M. D. Ehrenfest, L. Rasmusson, and T. Albrektsson, “Classification of platelet concentrates: from pure platelet-rich plasma (P-PRP) to leucocyte- and platelet-rich fibrin (L-PRF),” Trends in Biotechnology, vol. 27, no. 3, pp. 158–167, 2009.
[13] P. A. Everts, E. P. Overdevest, J. J. Jakimowicz et al., “The use of autologous platelet-leukocyte gels to enhance the healing process in surgery, a review,” Surgical Endoscopy and Other Interventional Techniques, vol. 21, no. 11, pp. 2063–2068, 2007.
[14] A. Scott, K. M. Khan, C. R. Roberts, J. L. Cook, and V. Duronio, “What do we mean by the term “inflammation”? A contemporary basic science update for sports medicine,” British Journal of Sports Medicine, vol. 38, no. 3, pp. 372–380, 2004. [15] H. Toumi and T. M. Best, “The inflammatory response: friend or enemy for muscle injury?” British Journal of Sports Medicine, vol. 37, no. 4, pp. 284–286, 2003.
[16] T. McCarrel and L. Fortier, “Temporal growth factor release from platelet-rich plasma, trehalose lyophilized platelets, and bone marrow aspirate and their effect on tendon and ligament gene expression,” Journal of Orthopaedic Research, vol. 27, no. 8, pp. 1033–1042, 2009.
[17] E. H. Kostelijk, R. Fijnheer, H. K. Nieuwenhuis, C. W. N. Gouwerok, and D. de Korte, “Soluble P-selectin as parameter for platelet activation during storage,”Thrombosis and Haemostasis, vol. 76, no. 6, pp. 1086–1089, 1996.
[18] R&D Systems I, “Human soluble P-Selectin/CD62P Immunoassay,” http://www.rndsystems.com/pdf/bbe6.pdf.
[19] B. Bird, E. W. Steart, and E. Lightfoot, Transport Phenomena, John Wiley & Sons, New York, NY, USA, 2nd edition, 2007.
[20] R. J. Hunter, Foundations of Colloid Science, Oxford University Press, New York, NY, USA, 2001.
[21] E. Anitua, J. J. Aguirre, J. Algorta et al., “Effectiveness of autologous preparation rich in growth factors for the treatment of chronic cutaneous ulcers,” Journal of Biomedical Materials Research B: Applied Biomaterials, vol. 84, no. 2, pp. 415–421, 2008.
[22] C. H. Jo, Y. H. Roh, J. E. Kim, S. Shin, K. S. Yoon, and J. H. Noh, “Optimizing platelet-rich plasma gel formation by varying time and gravitational forces during centrifugation,” The Journal of Oral Implantology, vol. 39, no. 5, pp. 525–532, 2013.
[23] R. Landesberg, M. Roy, and R. S. Glickman, “Quantification of growth factor levels using a simplified method of plateletrich plasma gel preparation,” Journal of Oral and Maxillofacial Surgery, vol. 58, no. 3, pp. 297–300, 2000.
[24] R. A. Kahn, I. Cossette, and L. I. Friedman, “Optimum centrifugation conditions for the preparation of platelet and plasma products,” Transfusion, vol. 16, no. 2, pp. 162–165, 1976.
[25] S. J. Slichter and L. A. Harker, “Preparation and storage of platelet concentrates. I. Factors influencing the harvest of viable platelets from whole blood,” British Journal of Haematology, vol. 34, no. 3, pp. 395–402, 1976.
[26] O. Bausset, L. Giraudo, J. Veran et al., “Formulation and storage of platelet-rich plasma homemade product,” Biores Open Access, vol. 1, no. 3, pp. 115–123, 2012.
[27] J. Araki, M. Jona, H. Eto et al., “Optimized preparation method of platelet-concentrated plasma and noncoagulating platelet-derived factor concentrates: maximization of platelet concentration and removal of fibrinogen,” Tissue Engineering C: Methods, vol. 18, no. 3, pp. 176–185, 2012.
[28] A. D. Mazzocca, M. B. R. McCarthy, D. M. Chowaniec et al., “Platelet-rich plasma differs according to preparation method and human variability,” The Journal of Bone & Joint Surgery A, vol. 94, no. 4, pp. 308–316, 2012.
[29] J. E. Fernandez-Barbero, P. Galindo-Moreno, G. ´ Avila-Ortiz, O. ´ Caba, E. Sanchez-Fern ´ andez, and H.-L. Wang, “Flow cytomet- ´ ric and morphological characterization of platelet-rich plasma gel,” Clinical Oral Implants Research, vol. 17, no. 6, pp. 687–693, 2006.
[30] C. Y. Su, Y. P. Kuo, H.-L. Nieh, Y. H. Tseng, and T. Burnouf, “Quantitative assessment of the kinetics of growth factors release from platelet gel,” Transfusion, vol. 48, no. 11, pp. 2414– 2420, 2008.
Авторское право © 2014 Аманда Г. М. Перес и др.
Это статья в открытом доступе, распространяемая с атрибуцией Creative Commons